慢性非细菌性前列腺炎患者 IL-6 和 IL-22 研究
2016年06月08日 4985人阅读 返回文章列表
海南医学2014年11月第25卷第22期 doi:10.3969/j.issn.1003-6350.2014.22.1298
·论 著·
慢性非细菌性前列腺炎患者前列腺液中 IL-6 和 IL-22 水平的研究
王成荣 1,卞廷松 2,史兵伟 3,谈小林 2,杨 凯 1
(1. 南京中医药大学,江苏 南京 210046; 2.常州市中医医院男科,江苏 常州 213003;
3. 常州市中医医院检验科,江苏 常州 213003)
【摘要】 目的 比较慢性非细菌性前列腺炎(CAP)患者与正常人前列腺液(EPS)中细胞因子 IL-6 和 IL-22 的水平。 方法 选择 24 例 CAP 患者为实验组和 10 例健康人为对照组,分别取两组受试者的 EPS,采用 ELISA 法检测其 IL-6 和 IL-22 水平。 结果 实验组 IL-6 值 11.65 pg/ml (4.42~17.78 pg/ml),IL-22 值(8.64±2.58) pg/ml; 对照组 IL-6 值 3.52 pg/ml (2.76~8.32 pg/ml),IL-22 值(9.31±2.26) pg/ml。实验组 IL-6 水平显著高于对照组(P< 0.01),但两组之间的 IL-22 水平差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 IL-6 可能与 CAP 之间存在一定的关系, IL-6 可能具有调节前列腺局部免疫反应的作用;而 IL-22 与 CAP 之间无明显联系,我们推测 IL-22 可能不参与前 列腺的局部免疫反应。
【关键词】 慢性非细菌性前列腺炎;IL-6;IL-22
【中图分类号】 R697+.33 【文献标识码】 A 【文章编号】 1003—6350(2014)22—3314—03
Levels of IL-6 and IL-22 in expressed prostatic secretion of patients with chronic abacterial prostatitis. WANG Cheng-rong 1 , BIAN Ting-song 2, SHI Bing-wei 3, TAN Xiao-lin 2, YANG Kai 1. 1. Nanjing University of TCM, Nanjing 210046, Jiangsu, CHINA; 2. Department of Andrology, Changzhou Hospital of TCM, Changzhou 213003, Jiangsu, CHINA; 3. Department of Clinical Laboratory, Changzhou Hospital of TCM, Changzhou 213003, Jiangsu, CHINA
【Abstract】 Objective To compare the levels of IL-6 and IL-22 in expressed prostatic secretion (EPS) of be- tween patients with chronic abacterial prostatitis (CAP) and healthy men. Methods Twenty-four patients with CAP were chosen as experimental group, and 10 healthy people were chosen as control group. The levels of IL-6 and IL-22 in EPS were detected by ELISA. Results The levels of IL-6 and IL-22 of experimental group were 11.65 pg/ml (4.42~17.78 pg/ml) and (8.64±2.58) pg/ml. The levels of IL-6 and IL-22 of control group were 3.52 pg/ml (2.76~8.32 pg/ml) and (9.31±2.26) pg/ml. Compared with the control group, the levels of IL-6 in experimental group was significantly higher (P<0.01), and the levels of IL-22 in experimental group showed no statistically significant dif- ference (P>0.05). Conclusion There may be a certain relation between IL-6 and CAP. IL-6 may regulate local im- mune response of prostate. There is no obvious relation between IL-22 and CAP, which indicates that IL-22 may not participate in the local immune response of prostate.
【Key words】 Chronic abacterial prostatitis (CAP); IL-6; IL-22
慢性非细菌性前列腺炎(Chronic abacterial prosta- titis,CAP)是泌尿男性科常见病和多发病，其对男性患者的生活质量以及精神有着较大影响。目前国内外研究者对其病因、发病机制的认识还略显不足，国内外诸多研究已表明炎症因子与慢性非细菌性前列腺炎之间有着较为密切的关系[1-2]。本实验通过比较 CAP 患者与正常人前列腺液(EPS)中细胞因子 IL-6、IL-22 的水平探讨 IL-6、IL-22 与 CAP 之间的关系，旨为在临床泌尿男性科医生对于此病的诊断、治疗及预后提供一些理论依据，以便更好地服务临床,服务患者。
基金项目:江苏省中管局项目(编号:LB09100) 通讯作者:卞廷松。E-mail:bst232370@163.com
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2009年7月至2011年1月 来南京中医药大学附属常州市中医医院男科门诊就 诊的 CAP 患者 24 例为实验组,年龄最小 20 岁,最大 47 岁,平均 28.8 岁,选择正常人 10 例作为对照组,年 龄最小 27 岁,最大 40 岁,平均 30.7 岁。
1.1.1 诊断标准 参照吴阶平主编的《吴阶平泌 尿外科学》制订。1症状:不同程度的尿频、尿急、尿 痛、尿不尽感,尿道灼热,于晨起、尿末或大便时尿道 偶有少量白色分泌物流出,会阴部、外生殖器区、下腹部、耻骨上区、腰骶及肛门周围坠胀、疼痛;2前列腺 触诊:前列腺表面不平或不对称;质地不均匀,可触及 炎性结节;有局限性压痛;3下尿路两杯法细菌培养 阴性,EPS 镜检:卵磷脂小体减少或消失。凡具备1~ 3中任何一项即可确诊。
1.1.2 纳入标准 1符合上述诊断标准;2病程 ≥3 个月者;3年龄 18~50 岁。
1.1.3 排除标准 1年龄在 18 岁以下和 50 岁以 上者;2有良性前列腺增生症、前列腺肿瘤、尿路疾病 及严重神经官能症患者;3合并有心血管、脑血管、肝 肾和造血系统等严重原发性疾病以及精神病患者;4 急性前列腺炎以及特异性前列腺炎患者;5离心尿白 细胞(WBC)>5 个/HP;6以局部疼痛为主要表现的患 者应注意排除下腹、会阴、腰骶等部位的其他病变,如 输尿管结石、精索静脉曲张等。
1.2 标本的收集与保存 先用新洁尔灭消毒尿 道外口,然后让患者取膝胸位,医生经直肠按摩采集 前列腺液标本,收集于无菌的痰培养皿中,最后移于 1.5 ml 离心管中,-80°C冷冻保存。
1.3 指标检测 采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法检测前列腺液中 IL-6、IL-22 的浓度。试剂分别为 人白介素-6 (IL-6),人白介素-22 (IL-22) ELISA 试剂 盒,均购自上海西唐生物科技有限公司。
1.4 实验方法
1.4.1 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 IL-22/抗人 IL-6 单抗包被于酶标板上,标 准品和样品中的 IL-22/IL-6 与单抗结合,加入生物素 化的抗人 IL-22/抗人 IL-6,形成免疫复合物连接在板 上,辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结 合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在 450 nm 处测 OD 值,IL-22 和 IL-6 浓度与 OD 值成正 比,可通过绘制标准曲线分别求出标本中 IL-22 以及 IL-6 浓度。
1.4.2 试剂盒组成 (1)酶标板;(2)酶标抗体工 作液;(3) 0×标本稀释液;(4) 20×浓缩洗涤液;(5)标准 品;(6)底物工作液;(7)第一抗体工作液;(8)终止液。
1.4.3 试剂的准备 1 10×标本稀释液用蒸 馏水作 1:10 倍稀释。2标准品液配制:使用前加 入 2 ml 蒸馏水混匀,IL-6 配成 10 ng/ml 的溶液(IL-22 配成 20 ng/ml 的溶液)。取 8 个 1.5 ml 离心管,第一管 加标本稀释液 900 μl,第二至第八管加入标本稀释液 500 μl。在第一管中加入20 ng/ml的标准品溶液100 μl 置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出 500 μl,移 至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出500 μl 弃去。第八管为空白对照。3洗涤液:用重蒸 水 1:20 稀释。
1.4.4 检测程序 1加样:每孔各加入标准品或待 测样品 100 μl,将反应板充分混匀后置 37°C 40 min。2 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 5 次,向滤纸上印 干。3每孔加入蒸馏水和第一抗体工作液各 50 μl (空白除外)。将反应板充分混匀后置 37°C 20 min。 4洗板:同前。5每孔加酶标抗体工作液 100 μl。将 反应板置 37°C 10 min。6洗板:同前。7每孔加入 底物工作液 100 μl,置 37°C暗处反应 15 min。8每孔 加入 100 μl 终止液混匀。9 30 min 内用酶标仪在 450 nm 处测吸光值。
1.4.5 结果计算与判断 所有 OD 值减除空白值 后再行计算。IL-6 以标准品 1 000、500、250、125、 62.5、31.2、15.6、0 (pg/ml)为横坐标,OD 值为纵坐标 [(IL-22以标准品2 000、1 000、500、250、125、62.5、31.2、 0 (pg/ml)为横坐标,OD 值为纵坐标],使用软件作图,画 出标准曲线。最后根据样品 OD 值计算出相应含量。
1.5 统计学方法 所有数据均使用 SASS19.0 软件进行统计学处理,计量资料正态数据以均数±标准差(x±s)表示,其组间比较采用成组 t 检验,偏态数据以 M (P25~P75)表示,其组间比较采用 Wilcoxon 秩和检 验,以 P<0.05 为差异有统计学意义。
2结果
与对照组比较,实验组 EPS 中的的 IL-6 水平显 著高于对照组,差异有显著统计学意义(P<0.01),而 IL-22 水平则低于对照组,但差异无统计学意义(P> 0.05),见表 1。
- 表 1 两组受试者的 EPS 中 IL-6 和 IL-22 水平比较(pg/ml,x±s)
组别 例数 IL-6 IL-22
对照组 10 3.52(2.76~8.32) 9.31±2.26
实验组 24 11.65(4.42~17.78) 8.64±2.58
检验值 -2.967 0.706
P 值 0.003 0.485
3讨论
CP 患者的 EPS 或精液中可以出现某些细胞因子水平的变化,EPS中细胞因子水平与慢性前列腺炎有一定的相关性,这些细胞因子的变化可以更早、更准确地体现前列腺的炎症状况。IL-6 是机体许多细胞产生的一种具有多种生物学活性的细胞因子，是机体内复杂细胞因子网络中的重要成员。体内主要由巨噬细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、角质细胞核T细胞等产生 IL-6。IL-6 主要通过自分泌或旁分泌产生，其能增强 T 细胞功能和 IL-2 的产生，具有免疫激活作用，可诱导中性粒细胞浸润到前列腺组织内，使 T、B 细胞及 NK 细胞广泛激活，促使中性粒细胞释放溶酶体酶，从而加剧局部炎症细胞浸润，促进炎症的形成[3]。IL-6 的生物学功能在正常情况下调节免疫应答，然而在病理情况下，其浓度的升高可引起免疫病理损伤。因此,患者体内 IL-6 的水平过高表达，会对前列腺组织造成损伤。此外，IL-6 对肝细、神经组织、造血系统也会有广泛影响，具有抗肿瘤效应。Paulis 等[4]曾对 207 例慢性前列腺炎患者前列腺液及精浆中的一些细胞因子水平进行研究，他发现与正常人相比，慢性前列腺炎患者的 IL-6 水平显著升高,因此其认为 IL-6 是临床诊断慢性前列腺炎比较好的指标之一。韦超等[5]通过大鼠制造 CAP 模型,发现 CAP 大鼠的前列腺组织内 IL-6 是高水平表达的,其进一步证 实了 IL-6 参与了前列腺组织炎症的形成或加剧了炎 症反应。因此我们认为 IL-6 能在一定程度上反映前列腺的炎症情况。
IL-22 最先于 2000 年由 Dumoutier 等[6]用 IL-9 刺激一株 T 淋巴瘤细胞系所发现。人的 IL-22 主要是由 T 细胞产生，包括 Th22 细胞、Th17 细胞，同时在 NK 细胞中可少量产生，而在巨噬细胞、成熟或不成 熟的 DC,以及非免疫细胞中都没有发现有 IL-22 的表达，目前的研究表明 IL-22 主要靶向于消化道、皮肤与呼吸器官的非造血细胞，它在黏膜固有免疫中起重要作用[7-8]。IL-22 的受体仅表达于表皮细胞和一些器官的纤维母细胞表面，现如今研究 IL-22 功能最透彻的疾病是银屑病[7]。IL-22 的受体复合物是以 IL-10R2 与 IL-22R1 构成的异源二聚体，其中 IL-10R2 广泛表达在各组织中，IL-22R1 则主要表达在皮肤、肾脏、胰腺、肝脏、小肠，而在 T 细胞、NK 细胞 和单核细胞中不表达，因此 IL-22 具有独特的作用，它由免疫细胞产生，但并不作用于这些免疫细胞，而是作用于组织细胞。我们检索了一些文献，在慢性前列腺炎方面目前还未发现有关 IL-22 的研究报道。
因此，我们选择了 IL-6 和 IL-22 两种因子作为研究对象，拟分别从 IL-6 和 IL-22 方面来研究它们与 CAP 之间的关系，由于 IL-6 在 CAP 中的作用，这方面已有一些研究。因此，我们此次最主要的是研究探讨 IL-22 是否与 CAP 的发病之间有联系。
研究结果显示，CAP 患者 EPS 中 IL-6 水平较之正常人明显升高(P<0.01) ，结合前人研究进一步说明了 IL-6 与 CAP 之间的密切联系，其参与了前列腺组织炎症的形成或者是加剧了炎症反应；而两组之间 IL-22 水平差异无统计学意义，提示 IL-22 与 CAP 之 间可能没有联系，我们推测 IL-22 可能不参与前列腺的局部免疫反应。IL-22 与慢性非细菌性前列腺炎之间关系到底是什么，其中缘由耐人寻味，有待于我们以及广大同仁的进一步研究探讨。
参考文献
[1] 谢作钢，陈盛镱，徐 潘，等. 不同证型慢性非细菌性前列腺炎前 列腺液细胞因子水平分析[J]. 浙江中医杂志, 2013, 1: 12-13.
[2] 郭 辉, 徐月敏, 叶章群, 等. 细胞因子及热休克蛋白在慢性前列腺炎患者精浆中的含量及其临床意义[J]. 中华男科学杂志, 2012,18(12): 1088-1092.
[3] 郭应禄, 李宏军. 前列腺炎[M]. 2 版. 北京: 人民军医出版社,2007: 347.
[4] Paulis G, Conti E, Voliani S, et a1. Evaluation of the cytokines in genital secretions of patients with chronic prostatitis [J]. Arch ltal Urol Androl, 2003, 75(4): 179-186.
[5] 韦 超, 刘朝东, 王洪志. 慢性非细菌性前列腺炎 CD4+T 淋巴细胞及 IL-6 的表达及意义[J]. 中国现代医学杂志, 2009,19(3):395-397.
[6] Dumoutier L, Louahed J, Renauld JC. Cloning and characterization of IL-10- related T cell-derived inducible factor (IL-TIF), a novel cytokine structurally related to IL-10 and inducible by IL-9 [J]. J Immunol, 2000, 164 (4): 1814-1819.
[7] 孙 奇. IL-22—炎症性疾病关键因子[J]. 免疫学杂志, 2011, 27 (9): 821-825.
[8] 刘晓斐, 石 云, 胡志德, 等. IL-22 诱导胃上皮细胞释放炎症因子 并促进淋巴细胞趋化[J]. 现代免疫学, 2012, 32(5): 371-375.
(收稿日期:2014-04-30)
慢性非细菌性前列腺炎患者前列腺液中IL-6和IL-22水平的研究
作者: 王成荣, 卞廷松, 史兵伟, 谈小林, 杨凯, WANG Cheng-rong, BIAN Ting-song, SHI Bing- wei, TAN Xiao-lin, YANG Kai
作者单位: 王成荣,杨凯,WANG Cheng-rong,YANG Kai(南京中医药大学,江苏 南京,210046), 卞廷松,谈小林 ,BIAN Ting-song,TAN Xiao-lin(常州市中医医院男科,江苏 常州,213003), 史兵伟,SHI Bing-
wei(常州市中医医院检验科,江苏 常州,213003)
海南医学
英文刊名: Hainan Medical Journal
年,卷(期): 2014(22)
本文链接:http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_hainanyx201422012.aspx
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